蛋白質N端測序服務-Edman法
服務簡介
幾乎所有的蛋白質合成都起始于N-端，蛋白質N-端的序列組成對于蛋白質整體的生物學功能有著巨大的影響力。例如N-端序列影響蛋白質的半衰期，同時關聯著蛋白亞細胞器定位等，這些與蛋白的功能和穩定性息息相關，對蛋白進行N-端測序分析，有利于幫助分析蛋白質的高級結構，揭示蛋白質的生物學功能。
對蛋白N端測序主要分類兩大類，其一為非質譜技術，其二為質譜技術。各自都有其使用的長處和制約之處。蛋白質和多肽N-端測序技術是以Edman化學降解法為基礎的。Edman化學降解是測定蛋白質一級結構的方法主要是從蛋白質或多肽氨基酸末端進行分析，其基本原理是包括通過異硫氰酸苯脂與蛋白質和多肽的N-端殘基的偶聯，苯氨基硫甲酰酞（PTC-肽）環化裂解，和噻唑呤酮苯氨（ATZ）轉化為苯異硫尿氨基酸（PTH-氨基酸）三個主要的化學步驟，每個循環從蛋白質與多肽裂解一個氨基酸殘基，同時暴露出新的游離的氨基酸進行下一個Edman降解，而后通過轉移的PTH-氨基酸鑒定實現蛋白質序列的測定。
百歐泰擁有多年的蛋白組學研究經驗，同時擁有經驗豐富的技術人員，優質的測序儀器，應用現有的質譜技術平臺，可以提供高質量的蛋白質N端測序服務。采用完善Edman測序系統，為廣大科研工作者和科研客戶提供純化后蛋白產物、蛋白品、抗體以及蛋白疫苗的N端測序服務。我們的不斷自我完善測序系統體系，通過Edman降解法可以確保精準測定N端多個氨基酸的序列信息。
蛋白質N端測序服務--Edman法
Edman法測定單個氨基酸循環包括3步：第一步是在堿性條件下，PITC與蛋白N端的游離氨基結合；第二步是在酸性溶液中，N端殘基被切除；第三步是PITC結合的殘基轉化成為更為穩定的PTH殘基，經過在線的HPLC分析，根據洗脫時間來確定氨基酸種類。
測序步驟：蛋白樣品一般先進行SDS-PAGE的分離，保證樣品的純度滿足測序的要求；隨后將SDS-PAGE上的蛋白樣品轉移到PVDF膜上；經過染色確定把蛋白條帶并切出；Edman測序儀對得到的PVDF膜上的蛋白樣品進行分析。
樣品要求
客戶提供 | 要求 |
PVDF轉膜樣品 | 具體轉膜條件請參照附件，請使用PVDF膜，不要用硝酸纖維素膜（NC膜），考馬斯亮藍R250或麗春紅染色 |
蛋白凍干粉 | 純度大于95%則不需要轉膜，樣品緩沖液需要不含鹽，提供20-60ug |
天然純化多肽樣品 | HPLC純度>95%，提供約100ug |
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服務優勢
蛋白表達及pulldown產物的鑒定：重組蛋白氨基酸順序驗證以及各種免疫沉淀蛋白產物的驗證
細胞株表達產物的驗證：驗證細胞株建立和發酵過程中蛋白產物N端甲硫氨酸和信號肽是否正確處理
超長氨基酸檢測：蛋白質N端長達67個氨基酸測序
抗體藥物N端序列驗證
天然提取，分離純化的小分子多肽序列鑒定
實驗周期快：2-3周
